Анализ краснуха в инвитро

Антитела класса IgМ к вирусу краснухи.

Определение IgM антител к вирусу краснухи используют в целях диагностики первичной инфекции вирусом краснухи (Rubella). Они могут быть обнаружены уже через 1 — 3 дня после появления клинических симптомов, и в большинстве случаев их концентрация быстро снижается за 6 — 8 недель от начала заболевания. Присутствие IgM антител к вирусу краснухи указывает на недавнюю инфекцию. Лабораторная диагностика этой инфекции у беременных женщин предпринимается для оценки риска инфицирования плода. Определение IgM важно также для диагностики врождённой краснухи у новорожденных детей. Особенности инфекции. Краснуха — острое вирусное инфекционное заболевание, которое может протекать в типичной, стёртой и асимптомной формах. Вирус краснухи во внешней среде нестойкий, поэтому для заражения требуется достаточно длительный и тесный контакт с больным. Передача инфекции происходит воздушно-капельным путём и трансплацентарно (от матери к плоду). Болеют в основном дети 1 — 7 лет. При инфицировании беременной женщины возникают тяжёлые пороки развития или самопроизвольное прерывание беременности. При передаче воздушно-капельным путём вирус поражает эпителиальную ткань верхних дыхательных путей, попадает в кровяное русло, затем — в лимфатические узлы, где происходит его репликация. Инкубационный период длится 15 — 21 день. У детей заболевание протекает относительно легко. Начинается с увеличения лимфатических узлов в области шеи и затылка, через 1 — 5 дней на лице появляется мелкопятнистая сыпь размером до 5 мм (не возвышающейся над поверхностью кожи). В течение суток сыпь распространяется сверху вниз на разгибательные поверхности конечностей, спину, ягодицы. Присоединяется незначительная лихорадка, катар верхних дыхательных путей. Через 1 — 3 дня элементы сыпи бесследно исчезают. У взрослых краснуха протекает тяжелее, чаще развиваются осложнения. Самое частое — полиартрит, длящийся 1 — 2 недели. Энцефалит возникает реже (1:5000), однако летальность в этом случае составляет 20 — 40%. Энцефалит может предшествовать сыпи на 1 — 12 дней, но чаще развивается на 3 — 4 сутки появления сыпи. При трансплацентарной передаче вирус поражает эндотелий капилляров плаценты, вызывая гипоксию плода, затем — эмбриональные ткани, где подавляет митотическую активность отдельных популяций клеток. Если первичное инфицирование краснухой происходит в течение первых 12 недель беременности, вирус переходит через плаценту и вызывает генерализованную и персистирующую инфекцию плода, которая почти всегда вызывает мультисистемное заболевание и врождённые пороки развития. При инфицировании в более поздние сроки беременности (13 — 16 недели и позже) частота развития дефектов у внутриутробно инфицированных младенцев снижается, но определённая опасность сохраняется вплоть до третьего триместра.

Особое значение лабораторная диагностика краснухи имеет у следующих категорий обследуемых

Важно! Краснуха входит в группу TORCH-инфекций (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях — Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes), считающихся потенциально опасными для развития ребёнка. В идеальном случае проконсультироваться с врачом и пройти лабораторное обследование на TORCH-инфекции женщине нужно за 2 — 3 месяца до планируемой беременности, поскольку в этом случае будет возможность предпринять соответствующие лечебные или профилактические меры, а также при необходимости в будущем сравнить полученные результаты исследований до беременности с результатами обследований во время беременности.

Краснуха (Rubella) входит в группу репродуктивно значимых инфекций, обозначаемых как TORCH-комплекс (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях — Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes); первичное инфицирование данными возбудителями, либо обострение уже имеющейся хронической инфекции из этой группы во время беременности является потенциально опасным для развития плода. По возможности, обследование на TORCH-инфекции (и на краснуху, в частности) целесообразно проходить за 5-6 месяцев до планируемой беременности, чтобы иметь представление о состоянии иммунитета по отношению к ним, при необходимости провести лечение, либо обеспечить профилактику (для краснухи — вакцинацию до беременности) и контроль. Обследование на TORCH-комплекс входит в план обследования женщин в период беременности.

Подтверждение или исключение факта недавнего инфицирования особенно важно при обследовании беременных женщин, поскольку именно при первичном инфицировании во время беременности высок риск вертикальной передачи инфекции и развития патологии плода. Использование авидности IgG-антител в качестве индикатора срока первичного инфицирования в настоящее время введено в практику серологических исследований на TORCH-инфекции.

Авидность (лат. — avidity) — характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами (определяется числом связывающих участков и силой связывания). В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью. Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идёт в сторону синтеза лимфоцитами высокоавидных IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами и, соответственно, более надежно их элиминирующих. Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование. 

В основе теста на авидность IgG антител лежит метод дифференциации высоко- и низкоавидных антител с помощью обработки комплексов антиген-антитело раствором, вызывающим денатурацию белка. После такого воздействия связь низкоавидных антител с антигеном нарушается, а высокоавидных – сохраняется. Авидность IgG-антител в пробе оценивают с помощью расчетного показателя – индекса авидности, который представляет собой отношение результата определения концентрации IgG-антител, включающего стадию обработки диссоциирующим раствором, к результату измерения концентрации IgG-антител без такой обработки.

Клинические симптомы краснухи бывают выражены по-разному, часто инфекция протекает субклинически и может быть диагностирована только с помощью лабораторных методов исследования. Бессимптомное течение инфекции у беременных не снижает вероятность инфицирования плода. Комплекс доступных в ИНВИТРО методов серологической диагностики краснухи включает количественное определение специфических IgM (тест № 85), специфических IgG (тест № 84) к вирусу краснухи, иммуноблот IgG антител (тест № 1142), определение индекса авидности специфических IgG антител. См. также ПЦР-исследование ДНК вируса в крови (тест № 338).

Средний инкубационный период краснухи длится 14-18 дней. Иммуноглобулины класса М могут быть обнаружены уже на 1-3 день после появления клинических признаков заболевания, их концентрация достигает максимального значения через 7–10 суток, и, при типичном течении инфекции, они исчезают через 4–5 недель. IgG появляются на 2–3 дня позже, их концентрация достигает максимума через 4–5 недель и остается на высоком уровне длительное время. ДНК вируса может выявляться за неделю до появления сыпи, после исчезновения сыпи вирус в крови обычно не выявляется.

Лабораторными признаками первичной инфекции вирусом краснухи — если не было недавней вакцинации — является выявление IgM антител, появление ранее отсутствовавших IgG антител (сероконверсия), 4-х кратный и более прирост уровня IgG антител в динамике за 10-14 дней. Обнаружение при скрининговом обследовании одновременно и IgM, и IgG антител может быть свидетельством недавнего первичного инфицирования, поскольку IgM антитела обычно исчезают через 2-3 месяца от начала инфекционного процесса (длительность индивидуально варьирует). Но специфичность даже лучших коммерческих тест-систем для обнаружения IgM-антител не абсолютна. В некоторых ситуациях, как следствие очень высокой чувствительности тестов, возможны неспецифические ложноположительные результаты (такие интерференции нередки среди беременных). Случаи реинфекции вирусом краснухи после ранее перенесенной краснухи либо после вакцинирования — крайне редки. Наряду с изучением сведений об иммунном статусе (вакцинации, перенесенном заболевании), недавних контактов (экспозиции к вирусу), клинических признаков — в подобной ситуации помогают дополнительные лабораторные исследования (исследование авидности IgG антител, иммуноблот IgG антител). Выявление в крови высокоавидных IgG антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование.

Низкоавидные IgG-антитела при краснухе в среднем, выявляются до 3-4 месяцев от начала инфекции, но иногда вырабатываются и в течение более длительного срока. Само по себе выявление низкоавидных IgG-антител не является безусловным подтверждением факта свежего инфицирования, но служит дополнительным подтверждающим свидетельством в ряду остальных серологических тестов. Следует иметь в виду, что у новорожденных и грудных детей в период до полугода и более в крови присутствуют пассивно приобретенные IgG материнского происхождения, поэтому интерпретация результатов исследования IgG и их авидности в этом возрасте затруднительна. В этих случаях, помимо исследования IgM/IgG антител, целесообразно использование ПЦР-тестов на присутствие ДНК вируса.

Индикатор наличия иммунитета к вирусу краснухи.

Антитела класса IgG к вирусу краснухи начинают вырабатываться через 3 — 4 недели с момента инфицирования и выявляются после окончания острого заболевания пожизненно, обеспечивая защиту от повторной инфекции. Выявление аnti-Rubella-IgG в концентрации менее 10 Ед/мл говорит об их недостаточном уровне для предохранения от клинических проявлений заболевания при экспозиции к вирусу краснухи или отсутствии.

Уровень аnti-Rubella-IgG более 10 Ед/мл рекомендован как показатель наличия иммунитета к данному вирусу. Определение титров аnti-Rubella-IgG в динамике (в парных исследованиях с интервалом 2 — 3 недели) используют при необходимости для подтверждения недавней инфекции вирусом краснухи (дополнительно к определению аnti-Rubella-IgМ). Достоверный рост титров IgG говорит об остроте процесса. Положительные результаты определения аnti-Rubella-IgG при тестировании пуповинной крови или крови новорожденных надо трактовать с осторожностью, поскольку специфические IgG могут передаваться плоду от матери через плаценту.

Особенности инфекции. Краснуха — острое вирусное инфекционное заболевание, которое может протекать в типичной, стёртой и асимптомной формах. Вирус краснухи во внешней среде нестойкий, поэтому для заражения требуется достаточно длительный и тесный контакт с больным. Передача инфекции происходит воздушно-капельным путём и трансплацентарно (от матери к плоду). Болеют в основном дети 1 — 7 лет. При инфицировании беременной женщины возникают тяжёлые пороки развития или самопроизвольное прерывание беременности. При передаче воздушно-капельным путём вирус поражает эпителиальную ткань верхних дыхательных путей, попадает в кровяное русло, затем — в лимфатические узлы, где происходит его репликация. Инкубационный период длится 15 — 21 день.

У детей заболевание протекает относительно легко. Начинается с увеличения лимфатических узлов в области шеи и затылка, через 1 — 5 дней на лице появляется мелкопятнистая сыпь размером до 5 мм (не возвышающейся над поверхностью кожи). В течение суток сыпь распространяется сверху вниз на разгибательные поверхности конечностей, спину, ягодицы. Присоединяется незначительная лихорадка, катар верхних дыхательных путей. Через 1 — 3 дня элементы сыпи бесследно исчезают.

У взрослых краснуха протекает тяжелее, чаще развиваются осложнения. Самое частое — полиартрит, длящийся 1 — 2 недели. Энцефалит возникает реже (1:5000), однако летальность в этом случае составляет 20 — 40%. Энцефалит может предшествовать сыпи на 1 — 12 дней, но чаще развивается на 3 — 4 сутки появления сыпи.

При трансплацентарной передаче вирус поражает эндотелий капилляров плаценты, вызывая гипоксию плода, затем — эмбриональные ткани, где подавляет митотическую активность отдельных популяций клеток. Если первичное инфицирование краснухой происходит в течение первых 12 недель беременности, вирус переходит через плаценту и вызывает генерализованную и персистирующую инфекцию плода, которая почти всегда вызывает мультисистемное заболевание и врождённые пороки развития. При инфицировании в более поздние сроки беременности (13 — 16 недели и позже) частота развития дефектов у внутриутробно инфицированных младенцев снижается, но определённая опасность сохраняется вплоть до третьего триместра.

Особое значение лабораторная диагностика краснухи имеет у следующих категорий обследуемых:

ВАЖНО! Краснуха входит в группу TORCH-инфекций (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях — Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes), считающихся потенциально опасными для развития ребенка. В идеальном случае проконсультироваться с врачом и пройти лабораторное обследование на TORCH-инфекции женщине нужно за 2 — 3 месяца до планируемой беременности, поскольку в этом случае будет возможность предпринять соответствующие лечебные или профилактические меры, а также при необходимости в будущем сравнить полученные результаты исследований до беременности с результатами обследований во время беременности.