Метод пцр на корь
Корь – высококонтагиозное антропонозное острое инфекционное заболевание с воздушно-капельным путем передачи. Возбудитель кори – РНК содержащий вирус (семейство Paramyxoviridae, род Morbillivirus). Только 1% восприимчивых лиц не заболевает корью при первом тесном контакте с больным.
Корь начинается с продромального периода, для которого характерны повышение температуры тела до 38°С и выше, кашель, насморк, чихание, покраснение глаз и светобоязнь, энантема в полости рта (пятна Филатова-Коплика). С 4-5 дня болезни наблюдается поэтапное высыпание пятнисто-папулезной сыпи (на первый день сыпь появляется на лице и шее, на второй день – на туловище, на третий день – на ногах и руках), на месте сыпи остается пигментация и отрубевидное шелушение. Инкубационный период длится в среднем около 10 дней (от 7 до 18 дней) с момента инфицирования дыхательных путей и до повышения температуры.
Несмотря на наличие доступных высокоиммуногенных вакцин, корь все еще остается одной из основных причин детской смертности в развивающихся странах и периодически приводит к возникновению крупных вспышек в индустриально развитых странах. В 2010-2011 годах крупные вспышки кори были зарегистрированы в ряде стран Африки, Юго-Восточной Азии и Европы (Франция, Германия, Болгария, Румыния). Особенно тревожная ситуация сложилась в 2012 году на Украине, где за три месяца заболело более 10000 человек. В Российской Федерации, большинство административных территорий которой в январе 2011 года были сертифицированы на отсутствие эндемичной кори, ситуация осложнилась в 2011-2012 годах в Южном и Северокавказском Федеральных округах, в Москве, Санкт-Петербурге и ряде других городов.
Вирус кори присутствует в крови, носоглоточных выделениях и моче во время продромального периода и в течение 3-4 дней с момента появления сыпи. АТ к вирусу кори впервые можно обнаружить в крови с момента появления сыпи. Максимальный уровень содержания АТ IgM в крови приходится на 4-7 дни после появления сыпи, они сохраняются в течение 28 дней, в редких случаях их можно обнаружить спустя 8 недель с момента появлении сыпи. АТ IgG начинают вырабатываться с момента появления сыпи и достигают максимального уровня через 2 недели; их можно выявить в течение долгих лет после перенесенной инфекции.
Показания к обследованию. Больные с диагнозом «корь», «корь ?» и с другими клиническими диагнозами, имеющие пятнисто-папулезную сыпь и температуру тела 37,5°С и выше.
Дифференциальная диагностика. Заболевания, протекающие с мелкопятнистой экзантемой (краснуха, скарлатина, инфекционный мононуклеоз, лекарственные и аллергические экзантемы, протекающие с повышением температуры тела).
Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение вируса кори, выявление РНК вируса кори, обнаружение АТ к вирусу кори.
Материал для исследования
- Сыворотка крови – выявление АТ;
- моча, назофарингиальные смывы, лимфоциты периферической крови – выделение вируса кори;
- мазки из носоглотки и ротоглотки – выявление РНК вируса.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Лабораторная диагностика коревой инфекции в рамках Программы элиминации кори в РФ проводится только в вирусологических лабораториях Региональных центров по эпидемиологическому надзору за корью с помощью тест-систем, рекомендованных ВОЗ. Для лабораторной диагностики кори применяют главным образом выявление АТ к вирусу (серологическая диагностика). Для диагностики кори используют как обнаружение АТ отдельных классов (IgM и IgG), так и количественное определение специфических АТ в крови для установления их значимого прироста при одновременном исследовании двух проб, полученных от больного в остром периоде и в период реконвалесценции (парные сыворотки).
Для выявления вирусоспецифических АТ IgM и IgG в настоящее время используется преимущественно метод ИФА. Благодаря высокой чувствительности и специфичности, простоте и скорости выполнения, возможности автоматизации исследования, метод доступен любой лаборатории. Для получения корректных результатов и облегчения их интерпретации большое значение имеет правильно выбранное по отношению к появлению клинических симптомов кори время забора образца.
Для выявления изменения уровня суммарных АТ с использованием реакции нейтрализации (РН) цитопатического действия вируса кори, требуется наличие двух образцов сыворотки крови, взятых у больного в остром периоде заболевания и на стадии реконвалесценции. Метод обладает 100% чувствительностью по отношению к клинически подтвержденным случаям. Этот тест не является легким в применении, потому что он требует наличия высококвалифицированного персонала, имеющего опыт работы с культурами клеток. Результаты анализа могут быть получены через 10 дней после получения сыворотки реконвалесцента.
Оценка изменения содержания специфических АТ с использованием метода РТГА также требует наличия двух образцов сыворотки крови, полученных у больного в остром периоде и на стадии реконвалесценции. У вакцинированных лиц метод демонстрирует 98% чувствительность. Этот тест также не является легким в применении, потому что требует высококвалифицированного персонала, а также наличие свежих эритроцитов обезьян. Результаты анализа могут быть получены через 2 дня после получения сыворотки реконвалесцента.
Выделение вируса кори выполняют на культуре клеток Vero. Обнаружение и идентификация вируса кори на культуре клеток может занять несколько недель, поэтому не рекомендуется использовать этот метод для первичной диагностики инфекции, изоляция вируса кори проводится в специализированных лабораториях.
Выявление РНК вируса методом ПЦР с обратной транскрипцией не получило пока широкого распространения. Секвенирование генома вируса кори применяется в целях определения генотипа возбудителя кори. Генетический анализ позволяет сравнивать штаммы, полученные из различных мест в разные годы, что позволяет получить информацию о происхождении вирусов и проследить пути их передачи.
Показания к применению различных лабораторных исследований. Для диагностики кори ВОЗ рекомендует использовать обнаружение вирус-специфических IgM методом ИФА в образце сыворотки крови, взятом после четвертого дня от момента появления сыпи. Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи.
При выявлении АТ IgМ к вирусу кори у пациентов с лихорадкой и пятнистопапулезной сыпью, обследуемых в рамках активного эпидемиологического надзора за корью, дополнительно проводится исследование для выявления АТ IgG методом ИФА в «парных сыворотках». Взятие крови для исследований осуществляется на 4-7 день с момента появления сыпи (1-я сыворотка) и не ранее чем через 10-14 дней от даты взятия первой пробы (2-я сыворотка).
Для определения напряженности иммунитета к вирусу кори ВОЗ рекомендует применять выявление АТ IgG в сыворотке крови методом ИФА.
Для выявления вируса кори и его РНК используют биоматериалы, взятые в продромальный период заболевания и в первые три дня после появления сыпи. При взятии образцов следует учитывать, что интенсивность экскреции вируса быстро падает.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Вирусоспецифические АТ IgM появляются в течение первых дней с момента высыпания, спустя месяц их уровень начинает быстро снижаться. Их наличие в крови пациента достоверно свидетельствует об острой свежей инфекции. АТ IgM также вырабатываются при первичной вакцинации и, хотя их уровень снижается быстрее, чем уровень АТ IgM, вырабатывающихся в ответ на инфицирование диким вирусом, специфические АТ IgM к дикому или вакцинному вирусу не могут быть разделены используемыми в рутинной диагностике методами. В этом случае для интерпретации полученных результатов следует обратиться к истории вакцинации конкретного пациента.
Поскольку исследование АТ IgM методом ИФА обладает максимальной чувствительностью между 4-м и 28-м днями от момента появления сыпи, то исследование образца крови, полученного в эти сроки, считается адекватным для диагностики кори. Повторное взятие образца крови может понадобиться в случае отрицательного результата выявления АТ IgM в первом образце крови, полученном в течение первых трех дней от момента появления сыпи. Повторное взятие крови для выявления АТ IgG выполняют через 10-14 дней после взятия первого. Нарастание титра специфических АТ IgG в 4 и более раза при одновременном исследовании обеих проб с использованием стандартных тестов является основанием для постановки диагноза «корь».
Источник
Корь — острое контагиозное заболевание, возбудитель которого — парамиксовирус рода Morbillivirus Polinosa morbillarum. Корь передаётся воздушным, воздушно-капельным и непрямым путём через предметы, контаминированные вирусом.
Заражаемость корью при контакте с заболевшим человеком или контаминированными предметами составляет около 100 %, поэтому самый эффективный способ профилактики — вакцинация.
Инфицированию подвержены люди всех возрастов, у которых нет стойкого иммунитета к вирусу. Они могут заболеть типичной или атипичной корью:
стёртой, митигированной — со слабо выраженными симптомами и нарушенным порядком их появления;
атипичной с аггравированными симптомами — гипертоксической (предельно выражена интоксикация), геморрагической (с экстравазатами в коже, содержащим кровь стулом, гематурией).
Инфекция опасна осложнениями (особенно у взрослых), развивающимися на её фоне и как следствие заболевания: отёком мозга (коревой энцефалит), менингитом (редко), слепотой, тяжёлой диареей с дегидратацией, ларингитом, отитом, крупом, пневмонией, лимфаденитом, гепатитом.
Именно они способны привести к летальному исходу, если не проводить эффективную сопутствующую терапию при первых признаках вторичного поражения. Осложнения чаще всего возникают у детей до 1—3 лет и взрослых старше 30 лет, в условиях недостаточной медицинской помощи, плохого питания, недостатка витамина А, ослабленного иммунитета, например, у ВИЧ-инфицированных.
После перенесённой кори часто наблюдается длительная астения, которая проходит без последствий при щадящем режиме учёбы, работы, полноценном питании, отдыхе.
Симптомы кори
Для течения болезни характерны общая интоксикация, лихорадка (гипертермия), сыпь на слизистых, макулопапулёзная сыпь (плоские и бугорковые высыпания на коже). Всё названное проявляется на разных стадиях заболевания, одновременно или последовательно.
Вирус атакует организм через слизистые глаз и дыхательных путей. В подслизистой, лимфоузлах происходит первичная репликация (создание копий вируса), после чего парамиксовирус попадает в кровь.
У кори довольно долгий период инкубации — до 14 (при стёртых формах до 27) суток. Он протекает бессимптомно. Первый признак заражения — высокая температура до 40 °C спустя 9—12 дней после заражения. Появляются насморк и кашель (сухой, иногда удушающий), глаза краснеют и слезятся, больно смотреть на свет (фотофобия, воспаление конъюнктивы), часто болит голова, а на слизистой щёк, напротив верхних маляров, выступают мелкие беловатые пятна с красным венчиком.
Затем, через 1—2 дня, лицо, заушные области, верхняя часть шеи покрывается сыпью — это стадия разгара. Примерно через 3 дня сыпь обнаруживается по всему телу и держится около недели. Коревая сыпь склонна к слиянию, чем отличается от краснушной сыпи.
При излечении сыпь исчезает через 6—7 дней, оставляя коричневые депигментированные участки — они исчезают ещё через 6—10 дней. Температура понижается до нормальной на 4—5-й день после появления высыпаний. Более долгий период лихорадки свидетельствует об осложнениях, потому нужно незамедлительно пройти новые исследования.
Источники инфекции, механизмы передачи
Заразиться корью воздушно-капельным путём от больного человека или предметов, с которыми он контактировал, можно с вероятностью до 100 %. Вирус мигрирует по воздуху в шахтах лифтов, в помещениях с кондиционерами, с иными источниками движения воздуха.
Вне носителя — в воздухе и на поверхностях — при комнатной температуре возбудитель активен в среднем 24 часа, при -20 °C — в течение 12 месяцев, при +37 °C — 2 часа, при +58 °C погибает мгновенно. От носителя он передаётся в период за 4 дня до кожных высыпаний и спустя 4 дня после того, как сыпь появилась.
Исследуемый материал для диагностики
Строгое доказательство поражения парамиксовирусом — серологическое подтверждение нахождения его в человеческом организме или собственно выделение парамиксовируса.
Серологическое подтверждение заключается в обнаружении специфических антител (класс М) или увеличении в сыворотке крови титра антител класса G (иммуноглобулины IgM и IgG).
Первым вырабатывается IgM, а через 3—4 недели после инфицирования — IgG, который сохраняется десятилетиями, надёжно защищая организм при новом заражении, и передаётся от матери к ребёнку через плаценту, сохраняясь у малыша до 6—7 месяцев.
Обычно корь довольно точно диагностируют по внешним клиническим признакам. Сложность вызывает диагноз митигированной кори — лёгкой формы заболевания, при который сыпь слабая, как и прочая симптоматика. Такая форма встречается у людей с активной или пассивной (перенесённое заболевание) иммунизацией, у грудничков, получивших антитела от матери плацентарно.
Для подтверждения или опровержения кори используют следующий биоматериал:
венозную кровь — в ней выявляют антитела;
назофарингиальные смывы, лимфоциты периферической крови (венозная кровь), мочу — для обнаружения собственно вируса кори;
мазки из носоглотки/ротоглотки — в них обнаруживают РНК (рибонуклеиновую кислоту) парамиксовируса.
Методы диагностики кори
Серологические методы
РСК — реакция связывания комплемента: к исследуемой сыворотке крови добавляют антиген, затем к их иммунному комплексу (если он возникает) — стандартный комплемент, далее проводят инкубацию в течение 60 минут при температуре +37 °C. Далее определяют результаты с помощью индикаторной гемолитической системы. Если в сыворотке нет специфических антител, комплемент будет несвязанным.
РТГА — реакция торможения гемагглютинации: метод основан на подавлении антигенов вируса иммунной сывороткой, вследствие чего вирус не может агглютинировать (склеивать) эритроциты.
РИФ — реакция иммунофлюоресценции: метод основан на способности антигенов микробов светиться в ультрафиолетовых лучах, если микробы обработать иммунной сывороткой с антителами, которые мечены флюорохромами. Для реакции используют секрет дыхательных путей или мочу.
Все перечисленные методы имеют некоторые трудности в определении антител: это или большая доля ложноположительных реакций (что предусматривает повторные анализы и траты жизненно важного времени), или высокая стоимость технологии, или определённая неточность в анализе, вызванная визуальным учётом результатов.
ИФА, или иммуноферментный анализ
Метод ИФА характеризуется высокой чувствительностью к антителам, стабильностью результатов и доступной стоимостью, потому используется в большинстве стран мира.
Ранняя ИФА-диагностика кори основана на выявлении антител IgM в сыворотке крови. Анализ особенно эффективен в период между 4-м и 28-м днём после того, как проявилась сыпь.
Примерно через 10—14 дней после первого анализа проводят второй — уже на присутствие и устойчивый рост титра антител IgG. Рост титра более чем в 4 раза — строгое основание для положительного диагноза кори.
Метод ОТ-ПЦР
Метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией относится к молекулярно-биологическим. Его ценность — в максимально раннем диагностировании кори, а условный недостаток — в необходимости дорогостоящего специального оборудования и обученного методу персонала.
ОТ-ПЦР основана на том, что вирус кори относится к РНК-содержащим. Реакция позволяет обнаружить молекулы РНК в биологическом образце. Метод относится к особо чувствительным, потому что обнаруживает даже минимальное количество молекул рибонуклеиновой кислоты.
Лечение и профилактика
Для кори нет специфической терапии. Выхаживание больных обычно проходит в домашних условиях и заключается в уходе, гигиенических процедурах, хорошем питании и устранении дегидратации приёмом оральных регидратационных растворов. Терапевтическая диета предусматривает молочно-растительный рацион в лихорадочный период и полноценное, богатое витаминами питание после нормализации температуры.
Детям с поставленным диагнозом назначают повышенные дозы витамина А. Хорошее питание и витамин А помогают снизить на 50 % вероятность слепоты и летальных исходов заболевания.
Сопутствующее лечение, госпитализация необходимы при тяжёлом течении болезни, при осложнениях. Вторичные инфекции — глазные, ушные — и пневмонию лечат антибиотиками. Специфической терапии для коревого энцефалита не существует, лечение заключается в назначении антигистаминных средств и глюкокортикоидных гормонов.
Если у больного выраженное психомоторное возбуждение, осторожно применяют психотропные препараты, при судорогах — противосудорожные.
Эффективная профилактика заключается только в иммунизации коревой вакциной. Чтобы предотвратить эпидемию или просто большое число заболевших, нужно своевременно выявлять и изолировать инфицированных.
Специальная дезинфекция помещений не является профилактическим средством, т. к. вирус крайне нестоек при обычной комнатной температуре.
Противокоревая иммунизация детей и взрослых
Вакцинация от кори чрезвычайно эффективна: 97 % вакцинированных не заболевают корью никогда. Настолько же, но с обратным результатом, эффективен отказ от вакцинации — при первом же контакте с заболевшим невакцинированный человек имеет почти 100-процентный шанс заразиться корью.
В 2017 году от кори умерли более 100 тысяч людей — детей и взрослых — во всём мире.
Всего за 10 лет — с 2000 по 2017 год — иммунизация снизила количество летальных исходов заболевания на 80 % и предотвратила более 20 миллионов смертей.
Противокоревая вакцина очень эффективна, безопасна. Часто её объединяют с вакцинами от краснухи, свинки (паротита), ветряной оспы, что нисколько не снижает эффективность и безопасность прививок.
Иммунизация детей
Национальный календарь вакцинации предусматривает 2 этапа иммунизации детей:
· в 12 месяцев — когда иммунитет, переданный младенцу от матери, исчезает;
· в 6 лет — когда ребёнок идёт в школу.
Иммунизация взрослых
Если по каким-то причинам прививки не были сделаны, вакцинируют подростков в 15—17 лет и взрослых до 35 лет. Вакцинация проводится также в 2 этапа с перерывом в 3 месяца.
После 35 лет человек может вакцинироваться по собственному желанию и уже за свой счёт. Это ограничение не действует для тех, кто в детстве не прошёл иммунизацию (лил вакцинировался однократно), никогда не болел корью или проконтактировал с инфицированным.
Противопоказания к иммунизации
Временные:
· заболевания в острой форме (инфекции и не-инфекции), в том числе — хронические. При хронических заболеваниях прививку о кори делают в период ремиссии;
· беременность.
Постоянные:
тяжёлая аллергия на аминогликозиды;
злокачественные новообразования и злокачественные патологии крови;
выраженная реакция на противокоревую вакцину: повышение температуры до 40 градусов и выше, отёк диаметром более 8 см в месте инъекции.
Важно знать!
Людям с ВИЧ-инфекцией вакцинация не противопоказана.
Не рассматривают врачи всего мира как противопоказание и аллергию на куриный/перепелиный белок, если аллергия не приводит к анафилактическому шоку, отёку Квинке, генерализованной крапивнице.
Что делать, если сведения о прививке не сохранились или неизвестны
В таком случае вакцинацию рекомендуют провести в любом возрасте.
Если прививка делалась, но о ней забыли, повторная иммунизация не нанесёт никакого вреда здоровью, зато обеспечит безопасность и душевный покой.
Лабораторная диагностика кори в Северо-Западном центре доказательной медицины
Во всех медицинских центрах и лабораторных терминалах АО «СЗЦДМ» вы сможете сдать анализ на диагностику кори. Для этого выберите на карте или в меню ближайшее к вам отделение/терминал и позвоните нам или закажите на сайте звонок вам, просто оформите заказ через форму сайта. Так же можно вызвать медицинскую сестру на дом или в офис, выезд осуществляется бесплатно, платим только за анализы.
В наших лабораториях анализы выполняются на современном оборудовании специалистами, прошедшими специальную подготовку для проведения сложных исследований.
Вы получите точный результат быстро и сможете своевременно начать лечение, что значительно повысит его эффективность.
Будьте здоровы и берегите себя!
Источник
