Методы исследования при кандидозе

Диагностика кандидоза осуществляется несколькими лабораторными методами:

микроскопическое и культуральное исследования (посев);
иммуноферментный анализ;
полимеразная цепная реакция.

Каждый из методов обладает своими особенностями и позволяет выявить болезнетворные микроорганизмы, которые провоцируют развитие кандидоза, или молочницы. Окончательный диагноз устанавливается только после того, как собран биоматериал и сданы все допустимые лабораторные анализы на кандидозы, а также получена расшифровка с положительными результатами по каждому пройденному виду клинического исследования.

Как диагностировать молочницу правильно, и какие методы используются при этом?

Общие положения диагностики кандидоза

Для того чтобы получить достоверный диагноз и определить какие анализы сдают при молочнице, необходимо учитывать следующие положения, которые являются ключевыми при проведении диагностических тестов:

Диагностика включает обязательное дифференцирование носителей инфекции от непосредственно страдающих этим заболеванием пациентов. Известно, что около 25% всего населения являются носителями кандидозных грибов в полости рта, кишечнике и детрите. Кандиду относят к условно-патогенным микроорганизмам, поэтому она всегда присутствует даже в нормальной микрофлоре человеческого организма.
Важно учитывать количество полученного биологического материала для исследования, поэтому в ряде случаев необходимы повторный забор биожидкостей и биопсия слизистых оболочек.
Если клетки кандиды проявляются случайно, то рекомендуется пройти полное обследование. Это связано с тем, что простая молочница может стать предвестником таких серьезных заболеваний, как СПИД, сахарный диабет и рак крови. В некоторых случаях поражаются внутренние органы.
Во время проведения лабораторных анализов необходимо стремиться повысить чувствительность кандиды к антимикотическим препаратам. Кроме того, важно правильно идентифицировать виды грибов и их численность.
Молочница полностью не исключает наличие возможных сопутствующих заболеваний. Возможно, что наряду с кандидозным поражением имеются туберкулезные, онкологические, аутоиммунные, аллергические и другие патологии.

Важен тот факт, что при диагностике некоторых инфекционных заболеваний необходимо обращать внимание на наличие псевдомицелия у кандиды, так как только вид Candida Albicans способен его образовывать. Но другие формы гриба, которые его не имеют, тоже могут присутствовать в лабораторном образце биологической жидкости.

лабораторная диагностика

Если при микроскопии Albicans не выявлена, то необходимо провести дополнительные исследования, которые смогут идентифицировать другие формы гриба, вследствие чего диагностируется молочница. В частности, лучшие результаты дает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Внешние критерии диагноза

Если имеет место орофарингеальная молочница, то необходимо учитывать наличие местных факторов риска:

съемные зубные протезы;
соски-пустышки;
наличие красного плоского лишая;
частое применение ингаляций с кортикостероидными препаратами.

Все это может вызывать дискомфорт в слизистой полости рта и жжение. Чаще всего наблюдаются фибринозные и атрофические изменения во рту.

Согласно стандарту диагностики кандидоза, в данном случае проводится цитологическое исследование образца биожидкости из полости рта. Если выявилось наличие псевдомицелия кандиды, то подтверждают предполагаемый диагноз.

При поражении грибом пищевода и желудка в качестве местных факторов риска рассматривают наличие ожогов, полипоза, дивертикулеза. Часто молочница развивается на фоне предшествующего оперативного вмешательства в ткани пищевода. В желудке может быть обнаружен эрозивный гастрит. Для проведения диагностики берется мазок-отпечаток слизистой оболочки желудка.

Кандидоз кишечника проявляется в виде абдоминальной боли; в стуле обнаруживают кровь и слизь. Также одновременно развивается системный кандидоз. Если имеет место кандидоз неинвазивный, то часто его сопровождают другие патологические бактерии (стафилококк, морганелла).

Показания к лабораторному исследованию

Микроскопическое исследование необходимо проводить в тех случаях, когда имеются явные признаки и симптомы развития инфекционного или воспалительного заболевания. Благодаря этому методу имеется возможность как выявить молочницу, так и определить настоящую этиологию патологического процесса. Клетки дрожжевого гриба кандиды легко обнаруживаются в биожидкости.

Посев на культуры рекомендуется проводить, когда молочница принимает рецидивирующий характер и длится достаточно долгий период времени. Важно проводить анализы на кандидозы, если их микроскопические формы и другие потенциальные возбудители заболевания не были обнаружены. Если проводилась антимикотическая терапия, то культуральный анализ показан в обязательном порядке. Он идентифицирует виды патологических микроорганизмов и помогает проявиться чувствительности к лекарственным препаратам антимикотического действия.

Кандиды питаются остатками тканей отмерших микроорганизмов. Они могут находиться на поверхности тела, коже и слизистых оболочках. Это говорит о том, что если во время диагностики обнаружены только ДНК кандиды, то этой информации для диагностики недостаточно. Какие анализы сдавать при молочнице, укажет лечащий врач во время осмотра, исходя из имеющихся жалоб и характерных клинических симптомов.

Микроскопическая диагностика

Лабораторная диагностика кандидоза имеет в своем арсенале несколько методов, с помощью которых можно быстро обнаружить дрожжеподобные грибы. Но лучшими из них признаны микроскопический анализ мазка, взятый с пораженных участков слизистой оболочки, и бактериологический посев. Это своего рода лабораторный «золотой стандарт», с помощью которого легко диагностируется молочница.

Хорошие результаты дает метод ПЦР (полимеразная цепная реакция), но для диагностики кандидоза его возможностей недостаточно. Рассмотрим микроскопические методы анализа более детально:

Микроскопия мазка. Благодаря ему проводится сравнительная характеристика бластоспор и псевдомицелия кандиды. Анализ на молочницу проводят с помощью фиксированных и нативных препаратов, которые окрашены по Граму, или в синий метиленовый. Именно обнаружение псевдомицелия говорит о том, что имеет место развитие инфекционного заболевания. Единственный недостаток микроскопии — это возможные визуальные ошибки при идентификации определенных видов бактерий. Диагностическая чувствительность этого метода тоже достаточно низкая и составляет максимально 40%. Для повышения чувствительности псевдомицелий клеток обрабатывают специальными красящими веществами. Благодаря контрастности проявляться под микроскопом они будут легко, отличаясь от других форм кандиды. Этот способ уже повышает чувствительность метода до 80%.
Бактериальный посев (культуральная диагностика). Благодаря этому методу исследования врачи имеют возможность не только выявить самого возбудителя инфекционного заболевания, но и определить его количественное соотношение. Успешно определяется и чувствительность кандидозных грибов к антимикотическим лекарственным препаратам. Важную роль в этом анализе играет предварительная подготовка, так как от количества бактерий в биологическом образце будет зависеть результат исследования. Диагностика молочницы занимает до 7 дней. Посев осуществляют в специальные плотные питательные среды. Чувствительность этого диагностического метода очень высока и достигает 95%. Микробиологическая диагностика кандидоза имеет свои недостатки — это высокая стоимость в некоторых клинических случаях и возможные проблемы при транспортировке биоматериала.

Диагностика кандидоза методом ИФА и ПЦР

ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяет распознать большой спектр возбудителей различных заболеваний. Он основан на способности человеческого организма вырабатывать антитела в качестве ответной реакции на появление антигенов (чужеродных веществ в сыворотке крови).

Тест состоит из двух частей: иммунной и ферментной реакций. Обе являются взаимозависимыми, так как иммунная реакция выявляет количество патологических клеток, позволяет определить их вид и связать их воедино, а ферментная — помогает визуализировать полученный результат.

Благодаря тому, что организм человека вырабатывает антитела, метод ИФА осуществляется за счет их образования. 5 видов белковых структур участвуют в выявлении инфекции:

Иммуноглобулины (антитела)
IgA	IgM	IgG	IgD	IgE

Для диагностики определенного заболевания берут только 1 вид антител, который выявляется наиболее чувствительным к антигенам возбудителя.

Суть ферментативной реакции заключается в том, что благодаря особым ферментам имеется возможность превратить весь исследуемый материал (субстрат) в другое вещество (продукт реакции). Причем во время воздействия фермента есть только 1 реакция, а воздействие конкретного фермента возможно только на конкретный субстрат. Таким образом, происходит узнавание или родство материалов.

анализ крови

Преимущество метода ИФА заключается в том, что он позволяет не только выявить наличие возбудителя и диагностировать заболевание, но и определить степень его развития. Например, с помощью данной методики можно определить хроническую или острую стадии патологии.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) напрямую способна обнаруживать возбудителя инфекционного заболевания, причем чувствительность этого анализа составляет 90%. Особенно важно то, что он позволяет дифференцировать грибы кандида с псевдомицелием от тех, что его не имеют. Это принципиально важно для последующей интерпретации результатов и диагностики.

Как интерпретируют полученные результаты?

Если во время проведения одного или нескольких лабораторных исследований были обнаружены бластоспоры и псевдомицелий грибов кандиды, то это является явным диагностическим признаком воспалительного заболевания кандидоза. Диагностика молочницы, таким образом, упрощается.

Если наряду с полученными результатами имеются ярко выраженные симптомы и признаки воспалительного процесса (покраснение тканей, неприятный «рыбный» запах), то это дает возможность поставить этиологический диагноз с определением локализации очага воспаления (уретрит, баланопостит, вульвовагинит и т.д.). В этом случае необходимость продолжать лабораторные исследования полностью отпадает.

Если получен отрицательный результат во время микроскопического исследования, то это еще не значит, что молочница отсутствует. Важно провести дополнительные лабораторные тесты с помощью других диагностических методов. Это позволит выявить возбудителей заболевания, особенно если оно протекает в хронической рецидивирующей форме.

Если были обнаружены дрожжеподобные грибы Кандида в биоматериале пациентов с клинической симптоматикой, и при этом имеются явные признаки инфекционного заболевания, но возбудители инфекции, передающейся половым путем, отсутствуют, то можно говорить о достоверности диагноза кандидоз; диагностика, однако, может быть затруднена, если инфекция вызвана грибами non-albicans (псевдомицелий отсутствует), поэтому возможен отрицательный результат при исследовании методом ПЦР. Это связано с тем, что его реагенты направлены на выявление только ДНК кандиды. Важно учитывать, что наличие ее ДНК в сыворотке крови тоже не является основанием для постановки диагноза кандидозной инфекции, если клинические и лабораторные признаки инфекции отсутствуют.

Источник

Кандидоз слизистых оболочек урогенитального тракта вызывается дрожжеподобными грибами рода Candida, наиболее частым и патогенным представителем которых является C.albicans (до 75–85% случаев). В остальных 15–25% случаях кандидоз вызывается C.tropicalis, C.parapsilosis, C.glabrata, C.krusei, C.guilliermondii, C.kefyr. Грибы рода Candida у значительного числа здоровых людей колонизируют слизистые оболочки ЖКТ, ротовой полости, урогенитального тракта и поверхность кожи, не вызывая развития патологического процесса. Однако у лиц, имеющих врожденные или приобретенные нарушения иммунитета, гормональный дисбаланс или длительно применяющих антибактериальные препараты, возможно активное размножение дрожжеподобных грибов, нарушающее баланс микрофлоры и приводящее к развитию инфекционно-воспалительного процесса. Урогенитальный кандидоз у мужчин протекает в виде баланопостита и уретрита, вызывая воспаление крайней плоти, головки полового члена и передней уретры. У женщин наиболее частая форма урогенитального кандидоза – кандидозный вульвовагинит, сопровождающийся воспалением слизистой влагалища и вульвы и выделениями из влагалища. Воспалительный процесс может распространяться на слизистую уретры и мочевого пузыря. Примерно у 5% женщин вульвовагинальный кандидоз приобретает рецидивирующий характер (4 и более эпизодов в год).

Показания к обследованию. У мужчин: дизурия, зуд в области передней уретры, крайней плоти; гиперемия и отечность головки полового члена, часто с налетом белого цвета.

У женщин: симптомы воспалительного процесса нижних отделов урогенитального тракта; патологические выделения из влагалища; болезненность при половых контактах.

Дифференциальная диагностика. Урогенитальный трихомониаз, бактериальный вагиноз, аэробный вагинит, хламидийная, гонококковая инфекция, инфекция, вызванная M.genitalium.

Этиологическая диагностика включает визуальное выявление бластоспор и псевдомицелия дрожжеподобных грибов с использованием микроскопии, выделение культуры Candida с видовой идентификацией, выявление ДНК C.albicans и других видов рода Candida.

Материал для исследований

Мазки/соскобы со слизистой влагалища – для диагностики вагинита;
Мазки/соскобы со слизистой уретры и/или крайней плоти – для диагностики уретрита и баланопостита.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Визуальное выявление бластоспор и псевдомицелия дрожжеподобных грибов рода Candida проводят в нативных или фиксированных препаратах, окрашенных метиленовым синим или по Граму, с использованием световой микроскопии. Микроскопическое исследование – наиболее часто применяемый метод диагностики кандидоза, так как позволяет обнаруживать вегетирующую форму грибов – псевдомицелий (за исключением C.glabrata), как дополнительный диагностический признак развития инфекционного процесса. Недостатком метода является субъективность и возможные ошибки при интерпретации результата, невозможность видовой идентификации, а так же низкая диагностическая чувствительность – 30–40%. Для повышения чувствительности и специфичности исследования препарат перед микроскопией обрабатывают 10–30% раствором КОН, в этом случае псевдомицелий и бластоспоры приобретают большую контрастность, чувствительность метода при манифестных формах кандидоза увеличивается до 60–80%.

Посев образца на плотные питательные среды используют для выделения культуры грибов рода Candida. Исследование позволяет определить вид гриба, провести количественную оценку степени обсемененности и определение чувствительности к антимикотикам. Процедура культивирования может занимать до 7 суток. Диагностическая чувствительность теста достигает 90–95%. Длительность культурального исследования и высокая стоимость ограничивает применение данного метода отдельными клиническими случаями. На эффективность культуральных методов влияют условия транспортировки биологического материала и сохранение жизнеспособности возбудителя.

Для выявления ДНК C.albicans и других видов Candida в РФ используют метод ПЦР с различными вариантами детекции продуктов реакции. Большинство серийно выпускаемых наборов реагентов направлены на качественное выявление ДНК C.albicans, что ограничивает применение метода. В настоящее время разработаны и серийно выпускаются наборы реагентов для выявления ДНК наиболее распространенных видов Candida: C.albicans, C.parapsilosis, C.tropicalis, C.glabrata, C.krusei с помощью мультиплексной ПЦР в реальном времени с количественной оценкой результатов. Данные наборы позволяют проводить как видовую идентификацию, так и оценивать массивность колонизации грибами рода Candida. Диагностическая чувствительность при диагностике кандидозного вульвовагинита находится в пределах от 90 до 98%.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Микроскопическое исследование биоматериала показано в случаях, когда у пациентов имеются симптомы и клинические проявления инфекционно-воспалительного процесса в качестве наиболее быстрого метода этиологической диагностики. Исследование позволяет наряду с выявлением лабораторных признаков воспаления обнаружить клетки дрожжеподобных грибов.

Культуральное исследование рекомендуется проводить при рецидивирующих формах инфекционно-воспалительных процессов, когда Candida не обнаруживаются микроскопически и исключены другие потенциальные возбудители патологического процесса (трихомонады и другие возбудители ИППП, возбудители аэробного вагинита). Определение степени обсемененности повышает информативность исследования. При возникновении рецидива воспалительного процесса на фоне проведенной антимикотической терапии необходимо провести культуральное исследование с видовой идентификацией и определением чувствительности к антимикотическим препаратам.

Поскольку грибы рода Candida относятся к сапрофитам и могут в низкой концентрации присутствовать на поверхности кожи и слизистых оболочек, то использование для диагностики только обнаружение ДНК (ПЦР, качественный формат) недостаточно информативно. Определение концентрации ДНК Candida видов albicans и non-albicans (ПЦР в реальном времени, количественный формат) позволяет определять степень обсемененности и может использоваться при рецидивирующих формах инфекционно-воспалительного процесса для установления его этиологии.

Особенности интерпретация результатов лабораторных исследований. Обнаружение бласпоспор и псевдомицелия дрожжеподобных грибов при микроскопическом исследовании является диагностическим признаком кандидоза. Наличие на этом фоне симптомов и лабораторных признаков воспаления (повышенное содержание ПМЯЛ в очаге) позволяет ставить этиологический диагноз с указанием топики процесса: вульвовагинит, уретрит, баланопостит. Дополнительные исследования в этом случае не требуются. Отрицательный результат микроскопического исследования не исключает наличия инфекции, особенно при хронических рецидивирующих формах.

Обнаружение ДНК грибов рода Candida у пациентов с клинической симптоматикой и лабораторными признаками уретрита, вагинита и отсутствие возбудителей ИППП (T.vaginalis, M.genitalium, N.gonorrhoeae, C.trachomatis) и маркеров бактериального вагиноза позволяет поставить диагноз кандидоза. Однако большинство выпускаемых наборов реагентов для ПЦР-исследования направлены на выявление ДНК C.albicans, поэтому возможны отрицательные результаты в случаях, когда кандидозная инфекция вызвана non-albicans видами Candida. Наличие ДНК Candida без клинических и лабораторных признаков инфекционно-воспалительного процесса не является основанием для постановки диагноза кандидоза.

Источник