Микробиологические исследования при кандидозах

Диагностика кандидоза осуществляется несколькими лабораторными методами:

• микроскопическое и культуральное исследования (посев);
• иммуноферментный анализ;
• полимеразная цепная реакция.

Каждый из методов обладает своими особенностями и позволяет выявить болезнетворные микроорганизмы, которые провоцируют развитие кандидоза, или молочницы. Окончательный диагноз устанавливается только после того, как собран биоматериал и сданы все допустимые лабораторные анализы на кандидозы, а также получена расшифровка с положительными результатами по каждому пройденному виду клинического исследования.

Как диагностировать молочницу правильно, и какие методы используются при этом?

Общие положения диагностики кандидоза

Для того чтобы получить достоверный диагноз и определить какие анализы сдают при молочнице, необходимо учитывать следующие положения, которые являются ключевыми при проведении диагностических тестов:

1. Диагностика включает обязательное дифференцирование носителей инфекции от непосредственно страдающих этим заболеванием пациентов. Известно, что около 25% всего населения являются носителями кандидозных грибов в полости рта, кишечнике и детрите. Кандиду относят к условно-патогенным микроорганизмам, поэтому она всегда присутствует даже в нормальной микрофлоре человеческого организма.
2. Важно учитывать количество полученного биологического материала для исследования, поэтому в ряде случаев необходимы повторный забор биожидкостей и биопсия слизистых оболочек.
3. Если клетки кандиды проявляются случайно, то рекомендуется пройти полное обследование. Это связано с тем, что простая молочница может стать предвестником таких серьезных заболеваний, как СПИД, сахарный диабет и рак крови. В некоторых случаях поражаются внутренние органы.
4. Во время проведения лабораторных анализов необходимо стремиться повысить чувствительность кандиды к антимикотическим препаратам. Кроме того, важно правильно идентифицировать виды грибов и их численность.
5. Молочница полностью не исключает наличие возможных сопутствующих заболеваний. Возможно, что наряду с кандидозным поражением имеются туберкулезные, онкологические, аутоиммунные, аллергические и другие патологии.

Важен тот факт, что при диагностике некоторых инфекционных заболеваний необходимо обращать внимание на наличие псевдомицелия у кандиды, так как только вид Candida Albicans способен его образовывать. Но другие формы гриба, которые его не имеют, тоже могут присутствовать в лабораторном образце биологической жидкости.

Если при микроскопии Albicans не выявлена, то необходимо провести дополнительные исследования, которые смогут идентифицировать другие формы гриба, вследствие чего диагностируется молочница. В частности, лучшие результаты дает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Внешние критерии диагноза

Если имеет место орофарингеальная молочница, то необходимо учитывать наличие местных факторов риска:

• съемные зубные протезы;
• соски-пустышки;
• наличие красного плоского лишая;
• частое применение ингаляций с кортикостероидными препаратами.

Все это может вызывать дискомфорт в слизистой полости рта и жжение. Чаще всего наблюдаются фибринозные и атрофические изменения во рту.

Согласно стандарту диагностики кандидоза, в данном случае проводится цитологическое исследование образца биожидкости из полости рта. Если выявилось наличие псевдомицелия кандиды, то подтверждают предполагаемый диагноз.

При поражении грибом пищевода и желудка в качестве местных факторов риска рассматривают наличие ожогов, полипоза, дивертикулеза. Часто молочница развивается на фоне предшествующего оперативного вмешательства в ткани пищевода. В желудке может быть обнаружен эрозивный гастрит. Для проведения диагностики берется мазок-отпечаток слизистой оболочки желудка.

Кандидоз кишечника проявляется в виде абдоминальной боли; в стуле обнаруживают кровь и слизь. Также одновременно развивается системный кандидоз. Если имеет место кандидоз неинвазивный, то часто его сопровождают другие патологические бактерии (стафилококк, морганелла).

Показания к лабораторному исследованию

Микроскопическое исследование необходимо проводить в тех случаях, когда имеются явные признаки и симптомы развития инфекционного или воспалительного заболевания. Благодаря этому методу имеется возможность как выявить молочницу, так и определить настоящую этиологию патологического процесса. Клетки дрожжевого гриба кандиды легко обнаруживаются в биожидкости.

Посев на культуры рекомендуется проводить, когда молочница принимает рецидивирующий характер и длится достаточно долгий период времени. Важно проводить анализы на кандидозы, если их микроскопические формы и другие потенциальные возбудители заболевания не были обнаружены. Если проводилась антимикотическая терапия, то культуральный анализ показан в обязательном порядке. Он идентифицирует виды патологических микроорганизмов и помогает проявиться чувствительности к лекарственным препаратам антимикотического действия.

Кандиды питаются остатками тканей отмерших микроорганизмов. Они могут находиться на поверхности тела, коже и слизистых оболочках. Это говорит о том, что если во время диагностики обнаружены только ДНК кандиды, то этой информации для диагностики недостаточно. Какие анализы сдавать при молочнице, укажет лечащий врач во время осмотра, исходя из имеющихся жалоб и характерных клинических симптомов.

Микроскопическая диагностика

Лабораторная диагностика кандидоза имеет в своем арсенале несколько методов, с помощью которых можно быстро обнаружить дрожжеподобные грибы. Но лучшими из них признаны микроскопический анализ мазка, взятый с пораженных участков слизистой оболочки, и бактериологический посев. Это своего рода лабораторный «золотой стандарт», с помощью которого легко диагностируется молочница.

Хорошие результаты дает метод ПЦР (полимеразная цепная реакция), но для диагностики кандидоза его возможностей недостаточно. Рассмотрим микроскопические методы анализа более детально:

1. Микроскопия мазка. Благодаря ему проводится сравнительная характеристика бластоспор и псевдомицелия кандиды. Анализ на молочницу проводят с помощью фиксированных и нативных препаратов, которые окрашены по Граму, или в синий метиленовый. Именно обнаружение псевдомицелия говорит о том, что имеет место развитие инфекционного заболевания. Единственный недостаток микроскопии — это возможные визуальные ошибки при идентификации определенных видов бактерий. Диагностическая чувствительность этого метода тоже достаточно низкая и составляет максимально 40%. Для повышения чувствительности псевдомицелий клеток обрабатывают специальными красящими веществами. Благодаря контрастности проявляться под микроскопом они будут легко, отличаясь от других форм кандиды. Этот способ уже повышает чувствительность метода до 80%.
2. Бактериальный посев (культуральная диагностика). Благодаря этому методу исследования врачи имеют возможность не только выявить самого возбудителя инфекционного заболевания, но и определить его количественное соотношение. Успешно определяется и чувствительность кандидозных грибов к антимикотическим лекарственным препаратам. Важную роль в этом анализе играет предварительная подготовка, так как от количества бактерий в биологическом образце будет зависеть результат исследования. Диагностика молочницы занимает до 7 дней. Посев осуществляют в специальные плотные питательные среды. Чувствительность этого диагностического метода очень высока и достигает 95%. Микробиологическая диагностика кандидоза имеет свои недостатки — это высокая стоимость в некоторых клинических случаях и возможные проблемы при транспортировке биоматериала.

Диагностика кандидоза методом ИФА и ПЦР

ИФА, или иммуноферментный анализ, позволяет распознать большой спектр возбудителей различных заболеваний. Он основан на способности человеческого организма вырабатывать антитела в качестве ответной реакции на появление антигенов (чужеродных веществ в сыворотке крови).

Тест состоит из двух частей: иммунной и ферментной реакций. Обе являются взаимозависимыми, так как иммунная реакция выявляет количество патологических клеток, позволяет определить их вид и связать их воедино, а ферментная — помогает визуализировать полученный результат.

Благодаря тому, что организм человека вырабатывает антитела, метод ИФА осуществляется за счет их образования. 5 видов белковых структур участвуют в выявлении инфекции:

Для диагностики определенного заболевания берут только 1 вид антител, который выявляется наиболее чувствительным к антигенам возбудителя.

Суть ферментативной реакции заключается в том, что благодаря особым ферментам имеется возможность превратить весь исследуемый материал (субстрат) в другое вещество (продукт реакции). Причем во время воздействия фермента есть только 1 реакция, а воздействие конкретного фермента возможно только на конкретный субстрат. Таким образом, происходит узнавание или родство материалов.

Преимущество метода ИФА заключается в том, что он позволяет не только выявить наличие возбудителя и диагностировать заболевание, но и определить степень его развития. Например, с помощью данной методики можно определить хроническую или острую стадии патологии.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) напрямую способна обнаруживать возбудителя инфекционного заболевания, причем чувствительность этого анализа составляет 90%. Особенно важно то, что он позволяет дифференцировать грибы кандида с псевдомицелием от тех, что его не имеют. Это принципиально важно для последующей интерпретации результатов и диагностики.

Как интерпретируют полученные результаты?

Если во время проведения одного или нескольких лабораторных исследований были обнаружены бластоспоры и псевдомицелий грибов кандиды, то это является явным диагностическим признаком воспалительного заболевания кандидоза. Диагностика молочницы, таким образом, упрощается.

Если наряду с полученными результатами имеются ярко выраженные симптомы и признаки воспалительного процесса (покраснение тканей, неприятный «рыбный» запах), то это дает возможность поставить этиологический диагноз с определением локализации очага воспаления (уретрит, баланопостит, вульвовагинит и т.д.). В этом случае необходимость продолжать лабораторные исследования полностью отпадает.

Если получен отрицательный результат во время микроскопического исследования, то это еще не значит, что молочница отсутствует. Важно провести дополнительные лабораторные тесты с помощью других диагностических методов. Это позволит выявить возбудителей заболевания, особенно если оно протекает в хронической рецидивирующей форме.

Если были обнаружены дрожжеподобные грибы Кандида в биоматериале пациентов с клинической симптоматикой, и при этом имеются явные признаки инфекционного заболевания, но возбудители инфекции, передающейся половым путем, отсутствуют, то можно говорить о достоверности диагноза кандидоз; диагностика, однако, может быть затруднена, если инфекция вызвана грибами non-albicans (псевдомицелий отсутствует), поэтому возможен отрицательный результат при исследовании методом ПЦР. Это связано с тем, что его реагенты направлены на выявление только ДНК кандиды. Важно учитывать, что наличие ее ДНК в сыворотке крови тоже не является основанием для постановки диагноза кандидозной инфекции, если клинические и лабораторные признаки инфекции отсутствуют.