Микроскопия мазка при кандидозе

Кандидоз слизистых оболочек урогенитального тракта вызывается дрожжеподобными грибами рода Candida, наиболее частым и патогенным представителем которых является C.albicans (до 75–85% случаев). В остальных 15–25% случаях кандидоз вызывается C.tropicalis, C.parapsilosis, C.glabrata, C.krusei, C.guilliermondii, C.kefyr. Грибы рода Candida у значительного числа здоровых людей колонизируют слизистые оболочки ЖКТ, ротовой полости, урогенитального тракта и поверхность кожи, не вызывая развития патологического процесса. Однако у лиц, имеющих врожденные или приобретенные нарушения иммунитета, гормональный дисбаланс или длительно применяющих антибактериальные препараты, возможно активное размножение дрожжеподобных грибов, нарушающее баланс микрофлоры и приводящее к развитию инфекционно-воспалительного процесса. Урогенитальный кандидоз у мужчин протекает в виде баланопостита и уретрита, вызывая воспаление крайней плоти, головки полового члена и передней уретры. У женщин наиболее частая форма урогенитального кандидоза – кандидозный вульвовагинит, сопровождающийся воспалением слизистой влагалища и вульвы и выделениями из влагалища. Воспалительный процесс может распространяться на слизистую уретры и мочевого пузыря. Примерно у 5% женщин вульвовагинальный кандидоз приобретает рецидивирующий характер (4 и более эпизодов в год).

Показания к обследованию. У мужчин: дизурия, зуд в области передней уретры, крайней плоти; гиперемия и отечность головки полового члена, часто с налетом белого цвета.

У женщин: симптомы воспалительного процесса нижних отделов урогенитального тракта; патологические выделения из влагалища; болезненность при половых контактах.

Дифференциальная диагностика. Урогенитальный трихомониаз, бактериальный вагиноз, аэробный вагинит, хламидийная, гонококковая инфекция, инфекция, вызванная M.genitalium.

Этиологическая диагностика включает визуальное выявление бластоспор и псевдомицелия дрожжеподобных грибов с использованием микроскопии, выделение культуры Candida с видовой идентификацией, выявление ДНК C.albicans и других видов рода Candida.

Материал для исследований

• Мазки/соскобы со слизистой влагалища – для диагностики вагинита;
• Мазки/соскобы со слизистой уретры и/или крайней плоти – для диагностики уретрита и баланопостита.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Визуальное выявление бластоспор и псевдомицелия дрожжеподобных грибов рода Candida проводят в нативных или фиксированных препаратах, окрашенных метиленовым синим или по Граму, с использованием световой микроскопии. Микроскопическое исследование – наиболее часто применяемый метод диагностики кандидоза, так как позволяет обнаруживать вегетирующую форму грибов – псевдомицелий (за исключением C.glabrata), как дополнительный диагностический признак развития инфекционного процесса. Недостатком метода является субъективность и возможные ошибки при интерпретации результата, невозможность видовой идентификации, а так же низкая диагностическая чувствительность – 30–40%. Для повышения чувствительности и специфичности исследования препарат перед микроскопией обрабатывают 10–30% раствором КОН, в этом случае псевдомицелий и бластоспоры приобретают большую контрастность, чувствительность метода при манифестных формах кандидоза увеличивается до 60–80%.

Посев образца на плотные питательные среды используют для выделения культуры грибов рода Candida. Исследование позволяет определить вид гриба, провести количественную оценку степени обсемененности и определение чувствительности к антимикотикам. Процедура культивирования может занимать до 7 суток. Диагностическая чувствительность теста достигает 90–95%. Длительность культурального исследования и высокая стоимость ограничивает применение данного метода отдельными клиническими случаями. На эффективность культуральных методов влияют условия транспортировки биологического материала и сохранение жизнеспособности возбудителя.

Для выявления ДНК C.albicans и других видов Candida в РФ используют метод ПЦР с различными вариантами детекции продуктов реакции. Большинство серийно выпускаемых наборов реагентов направлены на качественное выявление ДНК C.albicans, что ограничивает применение метода. В настоящее время разработаны и серийно выпускаются наборы реагентов для выявления ДНК наиболее распространенных видов Candida: C.albicans, C.parapsilosis, C.tropicalis, C.glabrata, C.krusei с помощью мультиплексной ПЦР в реальном времени с количественной оценкой результатов. Данные наборы позволяют проводить как видовую идентификацию, так и оценивать массивность колонизации грибами рода Candida. Диагностическая чувствительность при диагностике кандидозного вульвовагинита находится в пределах от 90 до 98%.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Микроскопическое исследование биоматериала показано в случаях, когда у пациентов имеются симптомы и клинические проявления инфекционно-воспалительного процесса в качестве наиболее быстрого метода этиологической диагностики. Исследование позволяет наряду с выявлением лабораторных признаков воспаления обнаружить клетки дрожжеподобных грибов.

Культуральное исследование рекомендуется проводить при рецидивирующих формах инфекционно-воспалительных процессов, когда Candida не обнаруживаются микроскопически и исключены другие потенциальные возбудители патологического процесса (трихомонады и другие возбудители ИППП, возбудители аэробного вагинита). Определение степени обсемененности повышает информативность исследования. При возникновении рецидива воспалительного процесса на фоне проведенной антимикотической терапии необходимо провести культуральное исследование с видовой идентификацией и определением чувствительности к антимикотическим препаратам.

Поскольку грибы рода Candida относятся к сапрофитам и могут в низкой концентрации присутствовать на поверхности кожи и слизистых оболочек, то использование для диагностики только обнаружение ДНК (ПЦР, качественный формат) недостаточно информативно. Определение концентрации ДНК Candida видов albicans и non-albicans (ПЦР в реальном времени, количественный формат) позволяет определять степень обсемененности и может использоваться при рецидивирующих формах инфекционно-воспалительного процесса для установления его этиологии.

Особенности интерпретация результатов лабораторных исследований. Обнаружение бласпоспор и псевдомицелия дрожжеподобных грибов при микроскопическом исследовании является диагностическим признаком кандидоза. Наличие на этом фоне симптомов и лабораторных признаков воспаления (повышенное содержание ПМЯЛ в очаге) позволяет ставить этиологический диагноз с указанием топики процесса: вульвовагинит, уретрит, баланопостит. Дополнительные исследования в этом случае не требуются. Отрицательный результат микроскопического исследования не исключает наличия инфекции, особенно при хронических рецидивирующих формах.

Обнаружение ДНК грибов рода Candida у пациентов с клинической симптоматикой и лабораторными признаками уретрита, вагинита и отсутствие возбудителей ИППП (T.vaginalis, M.genitalium, N.gonorrhoeae, C.trachomatis) и маркеров бактериального вагиноза позволяет поставить диагноз кандидоза. Однако большинство выпускаемых наборов реагентов для ПЦР-исследования направлены на выявление ДНК C.albicans, поэтому возможны отрицательные результаты в случаях, когда кандидозная инфекция вызвана non-albicans видами Candida. Наличие ДНК Candida без клинических и лабораторных признаков инфекционно-воспалительного процесса не является основанием для постановки диагноза кандидоза.