Принципы диагностики микозов методы лабораторной диагностики кандидозов
При поверхностных микозах (кератомикозах)
патологический процесс локализуется
преимущественно в поверхностных слоях
эпидермиса, не вызывая при этом видимой
воспалительной реакции в
дерме. В эту группу входят следующие
микозы.
Разноцветный
лишай (отрубевидный лишай). Возбудителем
является дрожжеподобный гриб Pityrosporumorbicutare
(Malasseriafurfur).
Заболевание
чаще
возникает у лиц молодого возраста при
чрезмерной потливости, при сахарном
диабете, ожирении,
длительной лихорадке. Очаги поражения
локализуются на коже груди, спины,
живота, шеи, плечах, проявляясь в виде
коричнево-красных пятен, сопровождающихся
шелушением.
Диагностика
проводится микроскопическим методом.
В
нативных препаратах соскоба кожи
элементы
гриба в
чешуйках рогового слоя выглядят в виде
коротких
нитей мицелия, а также скоплений округлых
почкующихся
клеток с толстой стенкой, размером до
8мкм в диаметре. При посеве материала
от больного на среду Сабуро при на 4-8-й
день культивирования при температуре
370
С появляются белые или кремовые колонии
с блестящей поверхностью, состоящие
из почкующихся дрожжеподобных клеток.
Черный
микоз (кладоспориоз). Возбудитель
— Cladosporiumwerneckii
вызывает появление
на коже ладоней или подошв светло-коричневых
или черных пятен,
шелушение отсутствует.
При
микроскопии нативных препаратов элементы
гриба обнаруживаются
в роговом слое
эпидермиса в виде коричневого ветвящегося
септированного мицелия и почкующихся
клеток.
Пьедра.
Заболевание
кутикулы волоса, характеризующееся
образованием на волосе узелков белого
или черного цвета.
Белая
пьедра (трихоспороз), встречаетсяв
виде спорадических случаев в странах
с умеренным климатом, возбудителем
является Trichosporonbeigelii
(Trichosporoncutaneum).При
микроскопии пораженных волос находят
мицелий и артроспоры,
прямоугольной, овальной или круглой
формы, а также
скопления спор. Узелки локализуются на
волосах подмышечной и паховой
областей, на бороде и волосистой части
головы.
Черная
пьедра, наоборот,
встречается в странах с жарким климатом.
Возбудитель — Piedraiahortai—
имеет аски, в которых находятся от 2 до
8 аскоспор размером
от 5 до 80мкм.
Лабораторная диагностика микозов, вызываемых условно-патогенными грибами (оппортунистические микозы)
Условно-патогенные
грибы обычно являются сапрофитами,
обитающими во внешней среде, а
также на коже и слизистых оболочках
человека. Оппортунистические микозы
возникают при длительном
контакте человека
с возбудителем, на фоне иммунодефицита,
нерациональной антибиотико-
и химиотерапии, приводящей к дисбактериозу
и т. д. Некоторые грибы в
благоприятных для них условиях способны
размножаться в пищевых продуктах
(например, в злаках) и накапливать
сильнодействующие микотоксины, вызывающие
тяжелые пищевые отравления (алиментарные
микотоксикозы).
Кандидоз (кандидамикоз)
Возбудителями
кандидоза – повсеместно распространенного
заболевания являются дрожжеподобные
грибы родаCandida
(наиболее
часто встречается видCandidaalbicans,
реже —Candidatropicalis,
Candidapseudotropicalis,
Candidakrusei,
Candidaglabrata
и т.д.).
Кандидоз
относится к типичным аутоинфекциям,
проявляясь избыточным ростом дрожжеподобных
грибов, заселяющих кожу, ногти, слизистые
оболочки, внутренние органы. Обычно это
заболевание возникает при патологии,
связанной с формированием иммунодефицита
(сахарный диабет, другие эндокринные
болезни, гипо- и авитаминозы,
иммунодепрессивная и лучевая терапия,
СПИД и т.д.), при дисбактериозе, обусловленном
длительным приемом антибиотиков.
Наиболее
подвержены кандидозу дети и старики.
Выделяют
поверхностный кандидоз слизистых
оболочек, кожи, ногтевых валиков и
ногтей. Кандидоз слизистых оболочек
полости рта или влагалища (молочница)
характеризуется появлением белого
налета, напоминающего
свернутое молоко
Хронический
генерализованный кандидоз
обычно развивается у детей с
иммунодефицитными состояниями, имеет
медленно прогрессирующее течение с
возникновением пневмоний,
гастритов, гепатитов и др.
При
висцеральном кандидозе поражаются
желудочно-кишечный
тракт, органы дыхания, мочевыделительная
система, ЦНС.
Аллергические
формы кандидоза развиваются на фоне
имеющегося первичного очага
кандидомикоза в результате сенсибилизация
организма, при этом могут возникать
новые очаги воспаления, в которых
возбудитель отсутствует.
Материалом
для исследования при кандидозе являются
чешуйки кожи и соскоб с ногтей,
отделяемое и пленки со слизистой оболочки
губ, полости рта,
влагалища, мочеиспускательного канала,
наружного
слухового прохода, а также с конъюнктивы.
При висцеральном кандидозе
исследуют кровь, спинномозговую жидкость,
мокроту, испражнения, мочу, желчь, мазки
со слизистых
оболочек, биоптаты тканей, пунктаты
абсцессов, секционный материал.
Лабораторная
диагностика кандидоза включает
микроскопию
нативных препаратов, выделение чистой
культуры гриба, обнаружение в материалах
антигенов или нуклеиновых кислот,
постановку серологических
реакций, аллергических проб.
Микроскопический
метод — изучение
неокрашенных и окрашенных по Граму,
Романовскому-Гимзе, Цилю-Нильсену
препаратов из исследуемого материала,
в которых обнаруживают
круглые или овальные почкующиеся
дрожжеподобные клетки, размером
от 3-6 мкм, и псевдомицелий в виде цепочек
удлиненных клеток (рис. 37).
Некоторые
виды дрожжеподобных грибов (C.albicans)
образуют
терминальные хламидоспоры.
По Граму
грибы рода Candidaокрашиваются
в темно-фиолетовый
цвет, по
Цилю-Нильсену
— в
синий с розово-желтыми
включениями липидов,
по Романовскому-Гимзе
— в розовато-желтый цвет с
темно-фиолетовыми включениями
волютина и красным хроматиновым
веществом.
Микологическое
исследование. Выделение
чистой культуры дрожжеподобных грибов
производят
на плотных средах (обычно среде Сабуро,
сусло-агаре, Кандида-агаре или
др.) с добавлением антибиотиков
(пенициллин, стрептомицин и т.д.) для
подавления роста сопутствующих бактерий.
Через
2-3 дня культивирования при 30-370
С образуются круглые,
диаметром
до 1 см, выпуклые сметанообразные гладкие
колонии белого цвета с ровными краями
и глубоким врастанием в среду ветвистого
древовидного псевдомицелия.
Выделенную
чистую культуру пересевают в жидкие
среды ( картофельную, кукурузную среды,
морковно-картофельный отвар и др.)
для
выявления псевдомицелия, появляющегося
обычно на
3-5
день культивирования (реже на 10-15 день
и позже) В жидких
питательных средах Candidaобразуют равномерное
помутнение,
осадок или пленку на поверхности среды.
Наряду
с псевдомицелием,
у этих грибов можно найти истинный
мицелий и
хламидоспоры
(крупные
двухконтурные споры
с зернистым содержимым) при посеве на
рисовый
или Хламидоспор-агар с последующим
культивированием гриба в условиях
пониженной температуры и концентрации
кислорода..
Рис.
37. Возбудитель кандидамикоза
(Candidaalbicans)
в
исследуемом материале
Бластоспоры
(почки)
у дрожжеподобных грибов рода Candida
располагаются нерегулярно по обеим
сторонам мицелия, хламидоспоры круглые,
крупные (10-20мкм),
двухконтурные. C.albicansсбраживает
глюкозу, мальтозу, левулезу и частично
галактозу;
молоко не изменяет.
Идентификация
дрожжеподобных грибов рода Candidaдо
уровня вида основывается на определении
типа филаментации,
наличия хламидоспор, ферментативной
активности (табл.
24).
Таблица 24. Сахаролитические
свойства дрожжеподобных грибов рода
Candida.
Вид гриба | Сахара | ||||
глюкоза | мальтоза | лактоза | галактоза | сахароза | |
Candidaalbicans | кг | кн | — | кг | — |
Candida | кг | кг | — | кг | кг |
Candida pseudotropicalis | кг | — | кг | кг | кг |
Candida krusei | кг | — | кг | — | — |
Обозначения: кг – расщепление субстрата
с образованием кислоты и газа
Характерным
дифференциальным признаком,
отличающим вид С.
Albicans
от других видов дрожжеподобных грибов
рода Candida,
является их способность образовывать
ростовые трубки —
трубкообразные выросты бластоспор
(признак РТ).
Для этого часть
колонии грибов
переносят в 0,5 мл стерильной
сыворотки теленка, пробирки
помещают в термостат при 370
С на 2,5-3,0
часа, после чего готовят препарат
раздавленной капли и микроскопируют
под большим увеличением микроскопа
(объектив х40). У ростовых
трубок отсутствует перемычка или
сужение на месте соединения с бластоспорой,
они тоньше, чем
удлиненная бластоспора или псевдомицелий
у С. tropicalis.
Для
дифференциации с другими грибами у
культур дрожжеподобных грибов определяют
наличие капсулы и уреазы (у кандид они
отсутствуют), определяют способность
ассимилировать и ферментировать
углеводы
(глюкозу, мальтозу, сахарозу, галактозу
и др.).
Для
быстрой идентификации С.
albicansразработаныспециальные
диски с хромогенными субстратами,
позволяющие выявить специфичные для
этого вида грибов ферменты
L-пролинаминопептидазу
и 3-галактозамидазу. На диск наносят
суточную культуру гриба,
инкубируют 30 мин при 35 °С, затем добавляют
1
каплю 0,3%-го раствора гидроксида натрия.
Появление
желтого окрашивания свидетельствует
об активности L-пролинаминопептидазы.
Затем добавляют 1 каплю коричного
альдегида;
развитие в течение 1 мин розово-красного
окрашивания свидетельствует
о наличии 3-галактозамидазы. Положительный
тест на оба фермента в сочетании с
наличием ростовых трубок считаются
достаточными для идентификации С.
albicans.
Серологический
метод (постановкаРСК,
РА, ИФА. РНГА, ВИЭФ и др. с парными
сыворотками
крови больных с целью определения
специфических антител)
обычно
проводится
при висцеральных формах кандидоза.
Результаты
исследования считают
положительными при нарастании титра
антител более чем в 4 раза в динамике
заболевания.
Для РА используются корпускулярные
антигены, для РСК
очищенные полисахариды,
лизаты
или ультразвуковые дезинтеграты
дрожжеподобных грибов.
Аллергологический
метод (преимущественно
у больных висцеральным кандидозом)
—
постановка внутрикожной аллергической
пробы со стандартным кандидозным
аллергеном, представляющим взвесь
клеток грибов, прогретую при 800
С в течение
2 ч. Результаты
реакции (гиперемия,
папула) учитывают через 24 — 48 ч. В связи
с широким распространением
сенсибилизации к антигенам грибов
аллергопроба имеет ограниченное
диагностическое значение.
Генодиагностика
— разработана ПЦР для инидикации
видоспецифического фрагмента
ДНК С.
albicans.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
Материалом
для исследования
являются
пораженные волосы, чешуйки кожи, кусочки
ногтей,
кожные и ногтевые соскобы, гной, мокрота,
пунктаты лимфатических
узлов, костного мозга, внутренних
органов, кровь, спинномозговая
жидкость, желудочный сок, желчь,
испражнения, биоптаты и др.
Материал берут стерильными инструментами
(пинцетом, скальпелем,
иглой, ножницами, ложечкой
Фолькмана и т.д.); тампоны для взятия
материала
не используются. Патологический
материал обрабатывают смесью едкого
калия с диметисульфоксидом (20
г КОН + 100 мл 60%-го ДМСО). Препараты
«раздавленной капли» исследуют под
большим увеличением (х40) обычного или
фазово-контрастного
микроскопа.
У
больных микроспорией в лучах люминесцентной
лампы пораженные волосы имеют
изумрудно-зеленое свечение.
Для
диагностики
микозов применяется широкий комплекс
лабораторных исследований (микроскопический,
микологический,
аллергический,
серологический, генетические методы,
биопроба – схема 23).
Схема
23. Лабораторные
методы диагностики микозов
Материал
для исследования:
пораженные волосы, чешуйки кожи, кусочки
ногтей,
кожные и ногтевые соскобы, гной, мокрота,
пунктаты лимфатических
узлов, костного мозга, внутренних
органов, кровь, спинномозговая
жидкость, желудочный сок, желчь,
испражнения, биоптаты и др.
Экспресс-диагностика:
РИФ, ПЦР
Микроскопический
метод: исследование
нативных и окрашенных препаратов с
целью обнаружения элементов гриба
(мицелия, спор)
Микологический
метод: посев
на специальные питательные среды
(Сабуро и др.). Идентификация
выделенной культуры гриба на основании
характеристики колоний,
микроскопического
строения гриба,
а также по биохимическим и другим
признакам.
Серологический
метод:
определение антител к грибам или их
антигенам в сыворотке крови больных
микозами с помощью РА, РСК, РНГА, РИФ,
ИФА, иммуноблотинга
Аллергический
метод: постановка
внутрикожных аллергических проб с
грибковыми аллергенами
Биопроба:
заражение
чувствительных животных
с последующим выделением чистой культуры
гриба
Микроскопический
метод
играет важную роль в диагностике микозов,
т.к. дает возможность быстро выявить в
нативных и окрашенных препаратах
наличие и расположение
клеток, спор гриба и нитей мицелия в
патологическом материале. Наиболее
часто для окраски грибов применяют
общепринятые методы Грама,
Романовского-Гимза,
Циля-Нильсена, Бурри. Разработан также
широкий набор специальных методов
окраски грибов.
Экспресс-диагностика микозов осуществляется
с помощью прямой РИФ.
Микологический
метод (выделение
чистой культуры гриба и ее идентификация)
является важнейшей составной частью
лабораторного исследования при микозах.
Посевы производят
на специальные плотные и жидкие
(неселективные и селективные) питательные
среды (среды Сабуро – мальтозо-пептонная,
сусло-агар, Чапека; кукурузный, рисовый,
картофельный, кровяной,
шоколадный, сердечно-мозговой,
угольно-дрожжевой агар и т.д.).
Селективные среды содержат антибиотики
(левомицетин, стрептомицин, пенициллин
и др.), красители (бенгальский розовый
и др.) или дезинфицирующие вещества. В
отличие от слабощелочных сред для
выращивания большинства бактерий, среды
для культивирования грибов имеют кислую
или слабокислую рН (5,7-6,8).
Для
первичной дифференциации грибов
разработан агар
CHROMс
хромогенными
субстратами, расщепляющимися
ферментами грибов с образованием
окрашенных соединений,
в результате чего колонии различных
видов грибов окрашиваются в разные
цвета –
красный, желтый, белый, кремовый,
коричневый,
черный и т.д.
Культивирование
грибов осуществляют обычно при
температуре 22-280
С в течение 2-4 недель. Идентификацию
выделенной культуры гриба проводят на
основании характеристики колоний
(внешний вид, форма,
консистенция, цвет), микроскопического
строения гриба (строение мицелия,
форма и расположение конидиеносцев и
конидий – спор),
а также по биохимическим и другим
признакам.
Серологический
метод –
определение антител к грибам или их
антигенам в сыворотке крови больных
микозами с помощью РА, РСК, РНГА, РИФ,
ИФА, иммуноблотинга
Аллергический
метод – постановка
внутрикожных аллергических проб.
Проводят
с грибковыми аллергенами, представляющих
собой взвеси
из убитых грибов, фильтраты обезвреженных
нагреванием культур, полисахаридные и
белковые фракции клеток гриба.
Результаты
аллергических проб учитывают через 20
мин (немедленные)
и через 24-48 ч (замедленные реакции).
Для
выявления грибковой сенсибилизации
организма
также применяют иммунологические тесты
invitro(дегрануляция
базофилов как тест гиперчувствительности
немедленного типа, а для выявления
гиперчувствительности
замедленного типа —
реакцию
торможения миграции лейкоцитов или
бласттрансформации лимфоцитов).
Биопроба
-заражение
чувствительных животных
(мыши, крысы, хомяки, кролики, морские
свинки, собаки,
кошки) различными способами (накожно,
внутрикожно, подкожно, внутримышечно,
внутрибрюшинно,
внутривенно, внутрисердечно,
интрацеребрально,
перорально, интратрахеально) для
выделения чистой культуры гриба.
Гистологический
метод направленна
обнаружение
гриба в тканях, полученных при биопсии
и аутопсии.
Генодиагностика.
Разработана
ПЦР для выявления в материале от больного
специфических фрагментов ДНК грибов,
позволяющая выявить
около 40 видов грибов, в том числе Candidaalbicans
и ее варианты,Т.
rubrumи
С.
neoformans,
различные видыAspergillus,
возбудителей паракокцидиоидомикоза
(Paracoccidioidesbrasiliensis)
и
гистоплазмоза (Histoplasmacapsulatum).
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
При поражении организма грибками крайне сложно вовремя обнаружить заболевание и выявить возбудителя. Довольно проблематична диагностика микозов, по той причине, что заболевание не проявляется никакими признаками либо имеет очень разнообразную симптоматику. В зависимости от того какой участок заражен паразитами для диагностики берут волосы, зараженные ногти, часть кожи, мокроту, кровь, небольшую часть внутреннего органа или лимфоузлов. Микоз — довольно серьезное поражение паразитами кожных покровов и внутренних органов, которое способно значительно навредить здоровью человека. Крайне важно своевременно провести качественную диагностику, которая заключается в лабораторных исследованиях.
Важность своевременной диагностики микоза
Микоз — достаточно серьезное поражение паразитами кожных покровов и внутренних органов. Заболевание способно нанести непоправимый вред здоровью, а порой и привести к летальному исходу. Поэтому крайне важно своевременно выявить патологию и предупредить развитие осложнений. В противном случае на коже возникают пятна, которые имеют свойство загнаиваться и лопаться с последующим вытеканием гноя. Возникает неприятный запах, который сложно устранить. С помощью ранних диагностических процедур у больных можно провести своевременное противогрибковое лечение с применением антифунгальных средств широкого спектра действия. Такая терапия позволит предотвратить распространение микоза по всему организму.
Вернуться к оглавлению
Первый прием
На приеме миколог проводит осмотр, а также назначает комплексное исследование.
При подозрении на микоз кожи или внутренних органов следует незамедлительно обратиться к дерматологу, а если есть возможность, к микологу. Эти специалисты в первую очередь проводят опрос больного, чтобы выяснить возможные пути инфицирования. Врач уточняет, не работал ли больной последнее время с животными или птицами, которые переносят паразитов. Крайне важно выяснить, в каких жилищных условиях обитает человек, не был ли он в неблагоприятных регионах. Затем проводится осмотр, в результате которого выявляются поврежденные кожные покровы, и определяется масштабность поражения. В процессе осмотра врач обращается внимание на иммунодефицитные состояния больного. Для диагностики микозов производится забор материала, который затем отправляют на лабораторное исследование.
Вернуться к оглавлению
Лабораторная диагностика
Самыми эффективными методами диагностирования микозов кожи являются различные лабораторные исследования, которые способны выявить возбудителя и помочь в подборе схемы терапии. Для выявления возбудителя микоза назначают такие лабораторные исследования:
- гистологический анализ;
- бактериологический посев;
- иммунологическое исследование;
- ПЦР-диагностирование;
- культуральное обследование;
- микробиологические исследования.
Вернуться к оглавлению
Микроскопия
Микробиологическая диагностика помогает обнаружить гриб, определить его род и вид.
Микробиологическая диагностика является наиболее распространенным и самым простым методом выявления микоза в крови и на коже. Для выявления точного диагноза, следует знать, как правильно собирать материал, который необходим при исследовании. Пораженные волосы следует собирать при помощи пинцета. Если инфицирована кожа, то для микроскопии следует соскоблить с поврежденного участка кожный покров. Весь забранный материал помещают в 30% раствор гидроксида калия, а затем на предметное стекло. Микробиологическая диагностика способна выявить, где именно расположен грибок (внутри или снаружи волоса, кожи) и его размеры.
Чтобы предотвратить ошибочный диагноз микоза, следует правильно и грамотно забирать материал для микробиологического обследования.
В медицине существуют такие методы микробиологической диагностики:
- Микроскопия с применением нативных или неокрашенных препаратов. Для этого материал осветляют с помощью 10—30% растворов гидроксида калия или натрия. Затем обработанный материал кладут на лабораторное стеклышко, куда предварительно накапали немного глицерины. Сверху прикрывают стеклянной пластинкой и проводят анализ.
- Микроскопию окрашенных препаратов проводят несколькими способами, которые идентифицируют бактерии, дифференцируют различные бактерии и выявляют разные грибы.
Вернуться к оглавлению
Бактериологический посев
Бактериологический посев – один из самых эффективных методов для диагностики.
Сбор бактериологического посева на питательную среду является точным способом диагностики микоза. Учитывая внешний вид и характеристики выросшей колонии грибка, дерматолог устанавливает тип возбудителя, вызвавшего микоз. Единственный минус обследования в том, что требуется много времени, чтобы вырастить колонию. В среднем необходимо около 3-х недель, чтобы выяснить штамм возбудителя. В некоторых случаях метод не приносит ожидаемых результатов.
Вернуться к оглавлению
ПЦР-диагностика
Метод ПЦР-диагностирования предполагает выявление возбудителя микоза с применением полимеразной цепной реакции. При обследовании увеличивается чувствительность гибридизации, что повышает содержимое вирусного ДНК в исследуемом материале. Этот метод обследования является новым и требует нескольких анализов от пациента. Считается, что такой вид диагностики достаточно затратный, но дает точные результаты.
Вернуться к оглавлению
Культуральное обследование
Культуральные диагностические мероприятия рекомендуются на финальном этапе постановки диагноза. Метод заключается в получении культуры грибка, которая потом отправляется на обследование с помощью микроскопа. Полученный материал кладут на искусственно созданную питательную среду и выявляют род возбудителя, внешний вид, размеры. После чего показано специальное лечение, которое направлено на борьбу с конкретным видом возбудителя микоза.
Вернуться к оглавлению
Иммунологический анализ
Иммунологический анализ помогает определить наличие антител в крови.
Иммунологический анализ часто применяется при подозрении на микозы крови. Этот метод предполагает обследование крови, спинномозговой жидкости или урины на наличие возбудителя. При иммунологической диагностике используют коммерческие тест-системы, которые выявляют специфические антигены в биоматериале. С помощью этих методов можно выявить специфичные антитела в сыворотке крови.
Вернуться к оглавлению
Гистология
Гистологический анализ способен выявить грибки в тканях, волосах, ногтях. При обследовании применяются гистологические окрасы. Чаще всего применяют периодическую кислотную реакцию, поскольку она является максимально информативной. При диагностике грибы проявляются в незначительном количестве и имеют вид спор или нитей мицелия.
Вернуться к оглавлению
Дифференциальный анализ
Проведение дифференциальной диагностики необходимо для постановки точного диагноза.
В связи с тем, что при разных видах микоза проявляются различные симптомы. Это затрудняет постановку точного диагноза. В таком случае медики прибегают к методу дифференциальной диагностики и сравнивают микоз с другими дерматологическими болезнями. Нередко симптомы псориаза путают с микозом, но важно знать, что при микозе соскабливаемые чешуйки не будут кровоточить, в отличие от псориатических бляшек.
Часто микоз путают с парапсориазом, который имеет похожую симптоматику, но не отмечается шелушением кожи.
Важно дифференцировать микоз от нуммулярной экземы. Такое заболевание является особым видом экземы, но выявить это можно лишь при лабораторной диагностике. Часто признаки микоза принимают за проявления полиморфного фотодерматоза, который свойствен только для взрослых. Он никогда не диагностируется у детей.
Проведение лабораторной и дифференциальной диагностики — важная мера при постановке точного диагноза и назначения необходимого лечения. Чтобы устранить до конца признаки микоза, требуется достоверно выявить возбудителя. При несвоевременном проведении диагностических процедур, патология прогрессирует и поражает все большую часть кожи и внутренних органов, вызывая осложнения.
Источник
