Тест система ифа краснуха

  Выявленные специфические IgG (при отсутствии IgM ) к возбудителю краснухи в концентрациях 10 МЕ/ мл и выше являются условно защитным титром.

Пациенты с уровнем концентрации IgG менее 10 МЕ/мл (ОП исследуемого образца менее ОП СК+)  могут быть отнесены к группе риска в отношении реинфекции или реактивации вирусом краснухи.

  Для постановки окончательного диагноза рекомендуется исследование на  ДНК Краснухи  методом ПЦР. Совокупность результатов ИФА, ПЦР, клиники и эпидемиологии  позволяет ставить окончательный диагноз на наличие краснухи.

ФОРМА ВЫПУСКА

  В набор тест-системы входят:

1  Иммуносорбент — планшет с иммобилизованным  антигеном

  вируса Краснухи  1 планшет

2.  К+ — положительный контрольный образец, инактивированный  1 флакон,1,3 мл

3.  К-  — отрицательный контрольный образец, инактивированный  1 флакон, 1,5 мл

4.  Конъюгат G — моноклональные антитела мыши к IgG человека

  с  пероксидазой хрена  1 флакон, 0,3 мл

5.  РБР-С  — разводящий буферный раствор для сывороток         1 флакон, 11 мл

6.  РБР-К  — разводящий буферный  раствор для  конъюгата         1 флакон, 13 мл

7. РПР-С – раствор для предварительного разведения сывороток  1 флакон, 13 мл

8. ФСБ-Т  — концентрат фосфатно-солевого буферного раствора

  с твином, 25-ти кратный                 1 флакон, 26  мл

9.  БРС  —  буферный раствор для субстрата                 1 флакон, 13 мл

10. ТМБ  — хромоген: раствор тетраметилбензидина в DMSO  1 флакон, 0,7 мл

11.  Стоп-реагент  (раствор серной кислоты)          1 флакон, 6 мл

12  (СК+) — cыворотка-калибратор с концентрацией специфических антител 

  к вирусу краснухи (10 МЕ/мл), инактивированная  1 флакон, 1,3 мл

СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ

  Срок годности тест-системы  9 месяцев со дня выпуска. Препарат с истекшим сроком годности применению не  подлежит. 

  Хранение  в соответствии с СП 3.3.1248-03  при температуре 2-8 0С в недоступном для детей месте.  Замораживание не допускается.

  Транспортирование осуществляют всеми видами крытого транспорта в соответствии с

СП 3.3.1248-03  при температуре 2-8 0С.  Допускается транспортирование при температуре

от 9 до 25 0С  в течении 10 дней.  Замораживание не допускается.

  Рекламации на качество наборов направлять в  ООО “ИмДи-спектр” по адресу:  (630559, Новосибирская область, Новосибирский р-н, пгт. Кольцово, а/я 172,  тел./факс  (383)- 336-76-23.

И Н С Т Р У К Ц И Я

ПО ПРИМЕНЕНИЮ  ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ  ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ

ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА G К ВИРУСУ КРАСНУХИ

“КРАСНУХА — IgG-АНТИТЕЛА”

  Тест-система представляет собой набор реагентов для выявления антител к  вирусу  Краснухи в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа: иммуносорбент —  планшет с иммобилизованным  антигеном вируса  Краснухи ; К+ — положительный контрольный образец: сыворотка крови человека, содержащая  антитела класса G к  вирусу краснухи, инактивированная, прозрачная жидкость красного цвета; (СК+) сыворотка-калибратор с концентрацией специфических антител к вирусу краснухи 10 МЕ/мл, инактивированная, бесцветная или светло-желтая жидкость;

К-  — отрицательный контрольный образец: сыворотка крови человека, не содержащая антител, инактивированная, прозрачная бесцветная или светло-желтая жидкость; Конъюгат G – конъюгат: моноклональные антитела мыши к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена, прозрачная жидкость зеленого цвета; РБР-С — разводящий буферный раствор для сывороток, прозрачная жидкость синего цвета; РБР-К — разводящий буферный раствор для конъюгата, прозрачная жидкость зеленого цвета; РПР-С – раствор для предварительного разведения сывороток, прозрачная  жидкость коричневого или светло-коричневого цвета; (ФСБ-Т) х25 — концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, прозрачная, слегка опалесцирующая, бесцветная жидкость; БРС – буферный раствор для субстрата с перекисью водорода, прозрачная бесцветная жидкость; ТМБ –хромоген:  раствор тетраметилбензидина в DMSO, бесцветная или светло-желтая жидкость; стоп-реагент – прозрачная бесцветная жидкость.

  Набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные образцы.

НАЗНАЧЕНИЕ

  Тест-система предназначена для  выявления иммуноглобулинов класса  G к  вирусу  Краснухи  в сыворотке (плазме) крови человека и может быть использована в клинике для постановки и подтверждения диагноза краснухи, а также для проведения эпидемиологических исследований и скрининга сывороток при контроле вакцинопрофилактики.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

  Для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу  Краснухи  возможно использование сыворотки (плазмы) крови как свежеприготовленной,  так и хранившейся при температуре 2-8 0С до 7 дней,  либо замороженной при температуре минус (20+3) 0С в течение 3 месяцев.

  Сыворотки, содержащие осадок, перед анализом должны быть очищены центрифугированием при 3 тыс. оборотах в течение 10 минут. Нельзя использовать термоинактивированные, а также сыворотки с добавлением азида натрия. Контаминированная микробами, гемолизированная или богатая липидами сыворотка (плазма) может давать ошибочные результаты. Избегать повторных циклов замораживания и оттаивания образцов.  Не допускается тестирование пула, содержащего несколько образцов сывороток.

  Для отбора исследуемых проб и компонентов  тест-системы  используется  автоматическая пипетка типа «Джилсон» или аналогичная с погрешностью измерения объемов не более 5%.

  Следует избегать загрязнения растворов, планшет механическими,  химическими примесями и микроорганизмами. В работе использовать только чистые (новые) наконечники для пипеток.

  Внимание: несмотря на то, что тест-система содержит инактивированные контрольные сыворотки, с системой следует обращаться как с потенциально инфекционным материалом: работать в резиновых перчатках, не пипетировать ртом, все использованные материалы подвергать обработке раствором  70% этилового спирта или раствором 6%перекиси водорода  с последующей выдержкой при температуре 20-22о С не менее  4 часов.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ И ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА

  Внимание: Перед использованием набора все компоненты тест-системы необходимо выдержать не менее 30 минут при температуре  18-25оС.

  При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов.

1.  Подготовка исследуемых образцов.

  Для проведения анализа используют образцы сыворотки или плазмы крови объемом не менее 20 мкл.

  Скрининг исследуемых сывороток проводят в разведении 1:100. Для этого готовится предварительное разведение исследуемых сывороток 1:10, т. е. в лунки вспомогательного планшета (в набор входит) вносят по 90 мкл РПР-С и по 10 мкл исследуемых сывороток. Тщательно перемешивают пипетированием, при этом РПР-С  меняет свой цвет.

2.  Приготовление реагентов.

  2.1. Приготовление ФСБ-Т.

При наличии во флаконе с ФСБ-Т визуально определяемого осадка солей флакон с концентратом выдержать при температуре (37±1) °С до полного растворения солей.

Содержимое одного флакона с ФСБ-Т перенести в мерный цилиндр вместимостью 1 л и довести объем раствора до 650 мл дистиллированной водой.

В случае использования одного или нескольких стрипов планшета в мерный цилиндр внести концентрат ФСБ-Т из флакона и добавить дистиллированную воду в соответствии с таблицей 1.

  Хранение: неиспользованный концентрат ФСБ-Т хранить при температуре от 2 до 8°С в течение срока годности набора, раствор ФСБ-Т — при температуре от 2 до 8 °С в течение месяца.

  2.2  Подготовка РБР-С, РБР-К, БРС

РБР-С, РБР-К, БРС — готовы к использованию.

  В  РБР-С и РБР-К возможно выпадение осадка. Перед использованием тщательно перемешать.

Хранение: после вскрытия флакона раствор хранить при температуре от  2 до 8°С в течение срока годности набора.

Подготовка контрольных образцов.

К+,СК+ и К — готовы к использованию.

Хранение: после вскрытия флакона до 48 ч при температуре от 20 до 25 °С, в течение срока годности набора при температуре от 2 до 8 °С.

  2.4 Приготовление рабочего разведения конъюгата:

  Для приготовления рабочего разведения конъюгата в чистый  флакон отобрать необходимое количество РБР-К в мл и добавить конъюгат в соответствии с таблицей 1.  Раствор тщательно перемешать, не допуская вспенивания.

  Хранение: рабочий раствор конъюгата до 15 мин при температуре от 20 до 25 °С, остаток концентрата при температуре от 2 до 8°С в течение срока годности набора.

  2.5 Приготовление рабочего раствора субстрата.

  При пониженной температуре возможна кристаллизация ТМБ во флаконе. В этом случае перед приготовлением рабочего раствора субстрата выдержать флакон с ТМБ  в течении 3-5 минут при температуре (37±1)°С до полного растворения ТМБ.

Раствор  ТМБ готовить непосредственно перед использованием в защищенном от света месте.

Для приготовления рабочего разведения ТМБ в чистый  флакон отобрать необходимое количество БРС в мл и добавить ТМБ в соответствии с таблицей 1. 

Раствор тщательно перемешать, не допуская вспенивания.

Хранение: рабочий раствор субстрата  до 20 мин при температуре от 20 до 25 °С в защищенном от света месте, остаток ТМБ хранить в течении срока годности набора при температуре от 2 до 8°С.

  2.6 Подготовка стоп-реагента.

Стоп –реагент готов к использованию.

  проведение иммуноФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

  Проведение первой реакции

  В лунки  планшета А1 и В1 внести  по 100 мкл К+, в лунки С1 и Д1  внести по 100 мкл СК+, в лунки Е1 и F1 по 100 мкл К-. В остальные лунки планшета внести по 90 мкл разводящего буферного  раствора для сывороток (РБР-С) и добавить по 10 мкл предварительно разведенных образцов сыворотки, тщательно перемешать пипетированием.  В лунку  H1 сыворотку не вносить, оставить с РБР-С  для контроля конъюгата. Таким образом, исследуемые сыворотки при скрининге разбавляются в 100 раз.

  Планшет заклеить пленкой и инкубировать в термостате 30 мин при температуре 37 0С.

  По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Планшет промыть 5 раз раствором ФСБ-Т, при помощи автоматического промывателя или вручную,  добавляя его в каждую лунку не менее, чем по 300 мкл, в процессе одного промывания. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек., остатки влаги удалить, постукивая планшетом по сложенной в несколько раз  фильтровальной бумаге

Проведение второй реакции

  После промывания и удаления влаги  внести  в каждую лунку планшета по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении (Приготовление п. 2.4).  Планшет закрыть, и инкубировать 30 мин. при температуре 37 0С.

  По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Планшет промыть 5 раз раствором ФСБ-Т, при помощи автоматического промывателя или вручную,  добавляя его в каждую лунку не менее, чем по 300 мкл, в процессе одного промывания. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек., остатки влаги удалить, постукивая планшетом по сложенной в несколько раз  фильтровальной бумаге

  Проведение ферментативной реакции

  Внести в каждую лунку планшета свежеприготовленный раствор хромогена ТМБ в БРС  объемом по 100 мкл (Приготовление п. 2.5). Планшет поместить на 15 мин в защищенное от света место при температуре 37 0С.

  Реакцию остановить внесением в каждую лунку стоп-реагента объемом по  50 мкл и измерить оптическую плотность.

  Внимание: стоп-реагент представляет  собой  раствор  серной  кислоты с концентрацией 0,9  моль/л.  В случае попадания на кожу раствора  хромогена или стоп-реагента необходимо их немедленно смыть водой с мылом.

  УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

  Результаты анализа регистрируют на спектрофотометре, измеряя оптическую плотность (ОП) при длине волны 450 нм. Нулевой уровень («бланк») задают по воздуху. Измерение  проводят  сразу или в течение 20 мин после остановки реакции.

  Результаты учитывают только в том случае,  если среднее значение ОП в лунках с контролем конъюгата (ОПкк) не превышает 0,15, в лунках с К — среднее значение ОП (ОПК-) не более 0,2,  (СК+) не менее ОПкрит,  а в лунках с К+ среднее значение ОП (ОПК+) не менее 1,0. 

  Для оценки результатов анализа вычисляется критический  уровень оптической плотности (ОПкрит.):

  ОПкрит. =  ОПк — + 0,2

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ